Biorunstar پیپٹائڈ کی ترکیب کے لیے کون سے ترکیب کے طریقے استعمال کرتے ہیں؟
RE: Biorunstar نے صارفین کی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے مختلف حل کے مرحلے کی ترکیب کے طریقے تیار کیے ہیں۔ عام طور پر، ٹھوس مرحلے Fmoc کیمسٹری کا اطلاق ہوتا ہے۔
آپ پیپٹائڈس کیسے بھیجتے ہیں؟ کیا QC ڈیٹا فراہم کیا جائے گا؟
RE: تمام پیپٹائڈس کو DHL یا FedEx ایکسپریس کے ذریعے کمرے کے درجہ حرارت پر انفرادی اچھی طرح سے لیبل والی شیشیوں میں لائو فلائزڈ پاؤڈر کی طرح بھیج دیا جائے گا۔ خام پیپٹائڈس کے استثناء کے ساتھ، جن کی جانچ صرف MALDI-MASS اسپیکٹومیٹری سے کی جائے گی، تمام مصنوعی پیپٹائڈس پروجیکٹ رپورٹ (CoA)، MS ڈیٹا اور HPLC ڈیٹا کے ساتھ آتے ہیں۔ ڈیٹا شیٹس فراہم کی جائیں گی جس میں اہم خصوصیات ہوں گی، جیسے پیپٹائڈ کی ترتیب، پاکیزگی، مقدار، ترمیم، ماس اسپیکٹرم ڈیٹا اور HPLC ڈیٹا۔
پیپٹائڈ کی ترکیب کے لیے عام موڑ کا وقت کیا ہے؟ میرے پاس بھیجنے میں کتنا وقت لگتا ہے؟
RE: 30 امینو ایسڈ سے کم معیاری پیپٹائڈ کے لیے ہمارا عام موڑ کا وقت 2-3 ہفتے ہے۔ باری باری کا وقت پیپٹائڈ کی لمبائی، مقدار، حل پذیری اور مشکل کے لحاظ سے مختلف ہوتا ہے۔ عام طور پر دوسرے ممالک میں محققین تک پہنچنے کے لیے 3-5 دن۔
آپ کب تک ترکیب کر سکتے ہیں؟
RE: Biorunstar کے پاس 130aa تک طویل پیپٹائڈس کی ترکیب سازی کا وسیع تجربہ ہے۔ بہت سے پیپٹائڈ سپلائرز کے برعکس جو صرف 30 یا 40aa سے کم پیپٹائڈز بنانے میں آرام سے ہیں، Biorunstar کو 40aa سے 90aa تک کے پیپٹائڈز بنانے کا اچھا تجربہ ہے۔ لمبی پیپٹائڈس کی ترکیب کرنا مشکل ہے، خاص طور پر 100aa یا اس سے زیادہ۔ اگر آپ 130aa یا اس سے زیادہ کی ترتیب کو سنتھیسائز کرنے کا ارادہ رکھتے ہیں، تو براہ کرم حسب ضرورت پروٹین ایکسپریشن اور پیوریفیکیشن سروس کے لیے ہم سے رابطہ کریں۔
اگر ترکیب یا طہارت کے عمل کے دوران کچھ مسائل سامنے آئیں تو کیا ہوگا؟
RE: ہر پیپٹائڈ کی اپنی مخصوص خصوصیات ہیں۔ اگر ترکیب کے دوران کچھ مسائل ہماری توقع سے زیادہ ہوتے ہیں، اور ہم آپ کے پیپٹائڈ کو وقت پر نہیں پہنچا سکتے، تو ہم آپ کو جلد از جلد مطلع کریں گے۔ اتفاق سے کہ ہم پیپٹائڈ بنانے کے قابل نہیں ہیں، آپ سے کوئی قیمت وصول نہیں کی جائے گی۔
TFA سالٹ فارم، Acetate یا HCl سالٹ فارم: مجھے کون سا فارم منتخب کرنا چاہیے؟
پہلے سے طے شدہ طور پر، پیپٹائڈس کو TFA نمک میں ترکیب کیا جاتا ہے۔ سیل یا ٹشو کلچر سے متعلق تجربات کے لیے، آپ کو غیر معمولی ردعمل سے بچنے کے لیے ایسیٹیٹ یا HCl نمک کی شکل میں 98 فیصد یا اس سے زیادہ پیپٹائڈس تیار کرنے پر غور کرنا چاہیے۔ اضافی قیمت پر Acetate یا HCl سالٹ فارم کی درخواست کی جا سکتی ہے۔
پیپٹائڈ کی شیلف زندگی کیا ہے؟
RE: پیپٹائڈس کم از کم ایک سال کے لیے مستحکم رہتے ہیں اگر فریزر میں لائو فلائزڈ رکھا جائے۔ اگر پیپٹائڈس تحلیل ہو جائیں تو شیلف لائف کم ہو سکتی ہے۔ اگر پیپٹائڈس میں کئی ری ایکٹو امینو ایسڈ ہوتے ہیں جن کو آکسائڈائز کیا جا سکتا ہے جیسے Trp، Met لیکن خاص طور پر Cys، شیلف لائف بھی کم ہو سکتی ہے۔
پیپٹائڈ میں کئی سسٹین ہوتے ہیں اور اس لیے آسانی سے ڈسلفائیڈ بانڈز بنا سکتے ہیں۔ میں اس سے کیسے بچ سکتا ہوں؟
RE: اگر پیپٹائڈ کی ترتیب میں کئی سسٹینز، یا دیگر رد عمل والے امینو ایسڈز شامل ہیں، جو آسانی سے آکسائڈائز ہو جاتے ہیں، تو Biorunstar مضبوط reductant DTT کے نشانات کے ساتھ پیپٹائڈ فراہم کرنے کی پیشکش کرتا ہے۔ پیپٹائڈ صرف ڈی ٹی ٹی کے ساتھ ڈیلیور کیا جاتا ہے اگر اس کی خاص طور پر گاہک کی طرف سے اجازت ہو۔
میں اپنے مصنوعی پیپٹائڈس کو کیسے ذخیرہ کروں؟
RE: زیادہ تر لائو فلائزڈ پیپٹائڈس کمرے کے درجہ حرارت پر 2-3 ہفتوں تک مستحکم رہیں گے۔ طویل مدتی ذخیرہ کرنے کے لیے، آپ کو لائو فلائزڈ پیپٹائڈس کو -20 ڈگری پر اسٹور کرنا چاہیے۔ بار بار منجمد پگھلنے کے چکروں سے گریز کیا جانا چاہئے۔ کھولنے سے پہلے کمرے کے درجہ حرارت پر آنے دیں۔ پیپٹائڈ حل کی شیلف زندگی محدود ہے؛ ایک بار تیار ہونے کے بعد پیپٹائڈ کا محلول جلد از جلد استعمال کرنا چاہیے۔
خام پیپٹائڈ اور ڈیسالٹڈ پیپٹائڈ کی پاکیزگی کیا ہے؟ آپ پیپٹائڈ کو کیسے صاف کرتے ہیں؟ نجاست کیا ہیں؟
RE: 15aa سے کم عام ترتیب والے مختصر پیپٹائڈس کے لیے، یہ عام طور پر HPLC کی طرف سے خام گریڈ کے لیے 40-60% ہے؛ 50-70% HPLC کی طرف سے ڈیسالٹڈ گریڈ کے لیے۔ پیپٹائڈ جتنا لمبا ہوگا، خام یا صاف شدہ کے لیے پاکیزگی اتنی ہی کم ہوگی۔ پیپٹائڈس کو عام طور پر HPLC کے ذریعہ پانی اور acetonitrile گریڈینٹ کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا جاتا ہے۔ زیادہ تر نجاست ٹکڑے ٹکڑے یا حذف کرنے والے پیپٹائڈس، نامکمل طور پر غیر محفوظ شدہ پیپٹائڈس، اور بقایا نمک اور پانی ہیں۔
HPLC، کل پیپٹائڈ مواد اور ہدف پیپٹائڈ مواد کی طرف سے پیپٹائڈ کی پاکیزگی کی وضاحت.
RE: Biorunstar lyophilized پاؤڈر کے مجموعی وزن کے مطابق پیپٹائڈز بھیجتا ہے۔ لائو فلائزڈ پاؤڈر میں نجاست جیسے ٹکڑے یا ڈیلیٹ پیپٹائڈس، نامکمل طور پر غیر محفوظ پیپٹائڈس، TFA اور بقایا پانی شامل ہیں۔ پیپٹائڈ پیوریٹی HPLC کے ذریعہ ماپا جاتا ہے۔ یہ تمام تجزیہ کاروں کے مقابلے میں درست پیپٹائڈ کی مقدار ہے جو ~214 nm (پیپٹائڈ بانڈ جذب کرتا ہے)، زیادہ تر ممکنہ طور پر حذف، تراشنا یا نامکمل طور پر غیر محفوظ شدہ ترتیب وغیرہ۔ HPLC کی طرف سے پیپٹائڈ کی پاکیزگی پانی اور نمکیات کو مدنظر نہیں رکھتی ہے۔ جو عام طور پر نمونے میں موجود ہوتے ہیں۔ کل پیپٹائڈ مواد لائو فلائزڈ پیپٹائڈ پاؤڈر میں موجود ہر چیز کے مقابلے میں موجود کل پیپٹائڈس کا فیصد ہے۔ کل پیپٹائڈ مواد کا تعین نائٹروجن مواد کے تجزیہ سے کیا جاتا ہے۔ لائوفیلائزڈ پیپٹائڈ پاؤڈر میں ہدف پیپٹائڈ مواد اس طرح فارمولہ کے ذریعہ نتیجہ اخذ کیا جاسکتا ہے: HPLC کے ذریعہ کل پیپٹائڈ مواد X پیپٹائڈ پیوریٹی۔
فلوروسین لیبلنگ کا طریقہ کیا ہے؟
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanate) فلوروسین لیبلنگ کے لیے استعمال ہونے والا ایکٹیویٹڈ پیشگی ہے۔ موثر Nterminal لیبلنگ کے لئے، ایک سات ایٹم امینوہیکسانویل
اسپیسر (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) فلوروفور (فلوروسین) اور کے درمیان داخل کیا جاتا ہے۔ پیپٹائڈ کا این ٹرمینس۔ یہ اسپیسر فلوروفور کو اس کے منسلک ہونے کے مقام سے الگ کرنے میں مدد کرتا ہے، ممکنہ طور پر فلوروفور کے بائیو مالیکیول کے ساتھ تعامل کو کم کرتا ہے جس سے یہ جوڑتا ہے اور اسے ثانوی پتہ لگانے والے ریجنٹس تک زیادہ قابل رسائی بناتا ہے۔
کیا بایوٹین (یا ایف آئی ٹی سی) کی سی ٹرمینل لیبلنگ ممکن ہے؟
RE: ہاں۔ بایوٹین (یا ایف آئی ٹی سی) کی سی ٹرمینل لیبلنگ پیپٹائڈ کے سی ٹرمینس پر لائسین کی باقیات کے اضافے کے ذریعے کی جاتی ہے، اور بایوٹین (یا ایف آئی ٹی سی) کو امائڈ بانڈ کے ذریعے لائسین سائڈ چین سے منسلک کیا جاتا ہے۔ لائسین کا مثبت چارج ہٹا دیا جاتا ہے۔
اینٹی باڈی کی تیاری کے لیے پیپٹائڈ کی مناسب لمبائی کیا ہے؟
RE: عام طور پر، ایک 10-25 باقیات پیپٹائڈ کی سفارش کی جاتی ہے۔ لمبے پیپٹائڈ میں زیادہ ایپیٹوپس ہوسکتے ہیں، لیکن اس میں مستحکم ثانوی ڈھانچے کی تشکیل کا زیادہ امکان بھی ہوسکتا ہے جو مقامی شکلیں نہیں ہیں۔ ایک چھوٹا پیپٹائڈ (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
MAP کیا ہے؟
RE: MAPS یا ملٹی-اینٹیجینک پیپٹائڈ ایک برانچڈ پیپٹائڈ ہے جس پر لکیری پیپٹائڈ چینز اپنے C-ٹرمینس پر پولی لیسین کور کے ذریعے منسلک ہوتی ہیں، اس طرح پورے مالیکیول کے سائز میں اضافہ ہوتا ہے۔ یہ KLH میں پیپٹائڈس کے جوڑے کو ختم کرنے کے لیے کیا جاتا ہے۔ ایسا لگتا ہے کہ، تاہم، MAP پر پیپٹائڈس کی تشکیل کم لچکدار ہے، اور MAP کے ذریعے حاصل کردہ اینٹی باڈیز عام طور پر روایتی KLH کنجوجیشن کے مقابلے میں کم کثرت سے ہدف والے پروٹین کو پہچانتی ہیں۔ اس کے علاوہ، MAPS بناتے وقت کوئی مفت پیپٹائڈ پیدا نہیں ہوتا، جس سے پولی لیسین کور ڈائریکٹڈ اینٹی باڈیز کو ہٹانا مشکل ہو جاتا ہے۔ HPLC کے ذریعے MAPS کو صاف کرنا مشکل ہے، اور MAPS اس کی متفاوت اور بڑے مالیکیولر سائز کی وجہ سے بڑے پیمانے پر تصدیق کے بغیر فراہم کیا جاتا ہے۔
میرا KLH- conjugated peptide محلول ابر آلود کیوں دکھائی دیتا ہے؟
RE: KLH یا Keyhole Limpet Hemocyanin ایک بڑی مجموعی پروٹین ہے (MW=4x105 – 1x107)۔ اس کے سائز اور ساخت کی وجہ سے، پانی میں اس کی حل پذیری محدود ہے، جس کی وجہ سے ابر آلود نظر آتا ہے۔ اس سے مدافعتی صلاحیت متاثر نہیں ہوگی اور ٹربڈ محلول کو حفاظتی ٹیکوں کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
کیا آپ مالڈی سپیکٹرا میں M+Na اور M+K ماس چوٹیوں کی وضاحت کر سکتے ہیں؟
RE: MALDI سپیکٹرم میں Na (سوڈیم) اور K (پوٹاشیم) کو شامل کرنا بہت عام ہے۔ سوڈیم اور پوٹاشیم پیپٹائڈ سالوینٹس میں استعمال ہونے والے پانی سے آتا ہے۔ یہاں تک کہ آست اور ڈیونائزڈ پانی میں بھی سوڈیم اور پوٹاشیم آئنوں کی مقدار پائی جاتی ہے، جسے کبھی بھی مکمل طور پر ختم نہیں کیا جا سکتا۔ یہ مالڈی ماس سپیک پروسیس کے دوران آئنائز ہو جاتے ہیں اور پیپٹائڈ کے فری کاربوکسائل گروپس سے جڑ جاتے ہیں۔ چونکہ پانی کو صاف کرنے کا کوئی نظام نہیں ہے جو پانی سے ہر ایک سوڈیم یا پوٹاشیم آئن کو نکال دے، اس لیے مالڈی بڑے پیمانے پر قیاس آرائیوں میں بعض اوقات سوڈیم اور پوٹاشیم کے اخراج کو دیکھنا بہت عام اور ناگزیر ہے۔ یہ اس بات کا اشارہ نہیں ہے کہ پیپٹائڈ خالص نہیں ہے، اور نہ ہی اسے غلط سالماتی وزن کے ساتھ الجھایا جانا چاہیے۔