پیپٹائڈ ترکیب کیا ہے؟

 

پیپٹائڈ ترکیب پروٹین اور پیپٹائڈ کیمسٹری میں ایک فعال میدان ہے، جس میں عام طور پر کیمیکل طریقوں سے پیپٹائڈ چین کی تشکیل کے لیے ایک متعین ترتیب میں امینو ایسڈ کا ترتیب وار اضافہ شامل ہوتا ہے۔ ترکیب کے اہم طریقے مائع فیز اور ٹھوس فیز ترکیب ہیں۔ LPPS کے مقابلے میں، SPPS میں تیز، آسان، کم ضمنی ردعمل، اور زیادہ پیداوار کے فوائد ہیں۔

 

معیاری SPPS طریقہ، بشمول Boc (benzyl) اور Fmoc (tBu) حکمت عملی۔

 

 

بوک (بینزائل) حکمت عملی

اس ترکیب کے نقطہ نظر میں، Chloromethylated، hydroxymethylated polystyrene اور p-methoxybenzyl (PMA) رال کو ٹھوس معاونت کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ امینو گروپ ٹی بٹوکسی کاربونیل (Boc) کے ساتھ محفوظ ہے، جبکہ امینو ایسڈ کے سائیڈ چین گروپ بینزائل ڈیریویٹوز سے محفوظ ہیں۔ Boc گروپ کو CH2Cl2 میں صاف TFA یا TFA کا استعمال کرتے ہوئے ہٹا دیا جاتا ہے، اور ترکیب کے اختتام پر، سائیڈ چین پروٹیکٹنگ گروپس اور پیپٹائڈ رال لنکیجز کو ایک مضبوط تیزاب جیسے اینہائیڈروس ہائیڈرو فلورک ایسڈ (HF) یا TFMSA کے ساتھ ہٹا دیا جاتا ہے۔

 

Fmoc (tBu) حکمت عملی

اس ترکیب کے نقطہ نظر میں، وانگ رال، 2-کلوروٹریٹیل کلورائد رال، رِنک امائڈ-اے ایم رال، رِنک امائڈ-ایم بی ایچ اے رال کو ٹھوس سپورٹ کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ امینو گروپ کو 9- فلورینیلمتھوکسائی کاربونیل (Fmoc) سے محفوظ کیا جاتا ہے۔ )، جبکہ امینو ایسڈ کے سائیڈ چین گروپ ایسڈ لیبل پروٹیکشن گروپس کے ساتھ محفوظ ہیں۔ Fmoc گروپ کو DMF میں 20% piperidine کا استعمال کرتے ہوئے ہٹا دیا جاتا ہے، اور ترکیب کے اختتام پر، 1%-95% TFA کے ساتھ سائیڈ چین پروٹیکٹنگ گروپس اور پیپٹائڈ رال لنکیجز کو ہٹا دیا جاتا ہے۔ Fmoc SPPS فی الحال پیپٹائڈ کی ترکیب کے لیے ترجیحی طریقہ ہے۔

 

Fmoc سالڈ فیز پیپٹائڈ کی ترکیب کے بنیادی اصول

 

رال کا انتخاب کریں۔

Fmoc SPPS میں سب سے زیادہ استعمال ہونے والی رالیں بشمول 4-Alkoxybenzyl الکحل (Wang) رال، 2-Chlorotrityl کلورائد رال، Rink Amide Resin، Rink Amide-MBHA رال۔ امائڈ ریزنز کو پیپٹائڈس کی ترکیب کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جس میں سی ٹرمینل امیڈیشن کی ضرورت ہوتی ہے۔ وانگ رال اور 2-Cl Trt رال عام طور پر C ٹرمینل فری COOH کے ساتھ ترکیب پیپٹائڈ کے لیے استعمال ہوتے ہیں۔ لیکن جب پیپٹائڈ کے سی ٹرمینس میں پرو اور گلائی پہلے امینو ایسڈ کے طور پر ہوتا ہے، تو ڈی کے پی (ڈائیکیٹوپیپرازین) کی تشکیل کے خطرے کی وجہ سے وانگ رال کا استعمال نہیں کیا جانا چاہیے، 2-کلوروٹریٹیل کلورائڈ رال استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔

 

 

محفوظ امینو ایسڈ کا رال سے منسلک ہونا

پہلا Fmoc امینو ایسڈ ایسڈ لیبل لنکر کے ذریعے ایک ناقابل حل سپورٹ رال سے منسلک ہوتا ہے۔

 

امینو پروٹیکشن گروپ کا تحفظ

پیپٹائڈل رال کے N-ٹرمینس پر عارضی Fmoc تحفظ دینے والے گروپ کو DMF میں 20% پائپریڈین کے محلول کے ساتھ علاج کرکے ہٹا دیا جاتا ہے۔ یہ ردعمل عام طور پر 10 سے 20 منٹ کے اندر ختم ہو جاتا ہے۔

 

قدموں کو دھونا

ہر کیمیائی عمل کے بعد، رال سے اضافی ری ایجنٹس، ضمنی مصنوعات، اور غیر رد عمل والے مالیکیولز کو ہٹانے کے لیے دھونے کے اقدامات کیے جاتے ہیں۔ اس سے بڑھتی ہوئی پیپٹائڈ چین کی پاکیزگی کو برقرار رکھنے میں مدد ملتی ہے۔

 

محفوظ امینو ایسڈ کو چالو کرنا اور جوڑا جانا

رال سے منسلک محفوظ امینو ایسڈ کو ترتیب میں اگلے امینو ایسڈ کے ساتھ جوڑنے کے لیے اس کی رد عمل کو بڑھانے کے لیے چالو کیا جاتا ہے۔ عام فعال کرنے والے ایجنٹوں میں HOAt، HOBt، PyBOP، PyAOP، HBTU اور HATU شامل ہیں۔ جوڑے میں فعال امینو ایسڈ اور بڑھتی ہوئی پیپٹائڈ چین کے امینو گروپ کے درمیان پیپٹائڈ بانڈ بنانا شامل ہے۔ ایک کیزر ٹیسٹ عام طور پر جوڑے کے رد عمل کی مکمل نگرانی کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔

 

قدموں کو دھونا

دھونے کے پہلے اقدامات کی طرح، یہ جوڑے کے رد عمل کے بعد اضافی ری ایجنٹس اور ضمنی مصنوعات کے خاتمے کو یقینی بناتا ہے۔

 

رال سے درار اور سائیڈ چین کی حفاظت کرنے والے گروپوں کا تحفظ

ایک بار جب مطلوبہ پیپٹائڈ ترتیب کو رال پر ترکیب کیا جاتا ہے، تو اسے ٹھوس سپورٹ سے کلیویج کاک ٹیل جیسے ٹرائی فلوورواسیٹک ایسڈ (TFA) کا استعمال کرتے ہوئے کلیو کیا جاتا ہے جس میں تھیوانیسول اور پانی جیسے گندگی شامل ہوتی ہے۔ اس کے ساتھ ہی، امینو ایسڈ کی باقیات پر سائیڈ چین کی حفاظت کرنے والے گروپوں کو ہٹا دیا جاتا ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ مکمل طور پر غیر محفوظ شدہ پیپٹائڈ صاف اور تجزیہ کے لیے تیار ہے۔